酵母RNA的提取与鉴定是分子生物学实验中的经典操作，以下是详细步骤及注意事项：
一、酵母RNA的提取
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细胞破碎与碱提取
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取1g干酵母粉，加入2g/L NaOH溶液10ml，沸水浴加热30分钟，期间需频繁搅拌防止凝固。
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加热完成后冷却，加入乙酸数滴调节pH至酸性（pH试纸检测），离心10-15分钟（4000r.p.m.）收集上清液。
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乙醇沉淀与纯化
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取上清液，加入2倍体积95%乙醇，边加边搅拌至沉淀完全，过滤。
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沉淀用95%乙醇洗涤2次（每次5ml），再用无水乙醚洗涤2次（每次5ml），最后用乙醚抽滤干燥，得到粗RNA。
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二、酵母RNA的鉴定
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紫外吸收光谱分析
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取0.5g RNA，加10%硫酸5ml沸水浴加热1-2分钟，水解后用DEPC水溶解。
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在260nm和280nm处测定吸光度，计算浓度和纯度。
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凝胶电泳分析
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取适量RNA，加甲醛变性后点样于琼脂糖凝胶，电泳观察条带形态。
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正常情况下，RNA条带应为单条带，与DNA条带（双条带）区分。
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地衣酚显色法（定性鉴定）
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取0.2g RNA，加2ml 10%H₂SO₄沸水浴加热2分钟，水解后加1.5ml地衣酚试剂沸水浴加热。
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加FeCl₃或CuSO₄作催化剂，观察是否生成鲜绿色复合物，判断RNA存在。
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三、注意事项
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pH控制 ：碱提取时pH需严格控制在11-12之间，避免过高导致RNA降解。
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离心操作 ：需对称放置离心管，避免因液体量不均损坏离心机。
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试剂配制 ：地衣酚试剂需新鲜配制，避免氧化影响显色效果。
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提取率计算 ：公式为：
$$\text{提取率（%）} = \frac{\text{RNA质量（g）}}{\text{干酵母粉质量（g）}} \times 100%$$例如：0.034g RNA/2.0096g酵母粉 = 1.72%。
通过以上步骤，可高效提取并鉴定酵母RNA，为后续实验提供可靠材料。
