以下是酵母质粒提取的常用方法，综合了多种技术手段及优化方案：
一、玻璃珠液氮法（推荐）
该方法以高效、低成本、操作简便著称，适用于实验室规模化提取。
步骤：
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细胞培养与收集
在2xYPAD培养基中30℃培养酵母至对数生长期，通过离心（1000g，10min）收集干细胞团。
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裂解细胞壁
将菌液与裂解液（如Lyticase）混合，在37℃下孵育200-250r/min，30-60min后离心（14000g，10min）收集原生质体。
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质粒提取
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酚氯仿抽提 ：加入等体积酚-氯仿混合液（如24:1），4℃离心10min，重复2次。
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乙醇沉淀 ：上清转移至Eppendorf管，加入8μl 10M NH₄Ac和95%-100%乙醇，-70℃孵育1h，4℃离心10min。
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纯化与转化
- 用70%乙醇洗涤质粒，转移至转化培养基中（如TE缓冲液），4℃预冷后进行转化。
优势 ：产率、纯度均高于传统方法，且操作简单、成本低。
二、其他常用方法
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试剂盒法
通过商业试剂盒完成裂解、离心、纯化等步骤，适合快速实验。
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碱裂解法
使用裂壁酶（如Lyticase）直接裂解细胞壁，再通过酚氯仿抽提质粒。
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二次酸性水醇沉淀法
传统方法，需用酸性水、酒精等试剂破碎细胞并沉淀质粒，但操作复杂且污染风险较高。
三、注意事项
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细胞活性 ：裂解后建议-20℃保存或及时转化，避免活性损失。
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仪器要求 ：高压破碎仪、离心机等需规范操作，确保细胞充分破碎且无残留。
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污染控制 ：操作中需佩戴防护装备，避免化学试剂交叉污染。
建议优先采用玻璃珠液氮法，平衡效率与成本，同时结合质粒纯度验证选择合适方法。
