提取RNA时选择酵母作为原料的主要原因如下:
一、高RNA含量
酵母细胞中RNA含量显著高于其他常见微生物(如细菌),其细胞质中RNA占比可达2.67%~10.0%,而DNA仅占0.03%~0.516%。高RNA含量直接提高了RNA的产量,降低实验成本。
二、易分离性
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pH调节法
酵母RNA的等电点为pH 2.5,在pH 2.0~2.5的酸性环境中易沉淀,通过离心可高效分离。
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乙醇沉淀法
RNA不溶于乙醇,可用酸性乙醇使RNA沉淀,再用乙醇洗涤去除蛋白质杂质。
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蛋白质去除
酵母细胞壁破碎后,结合蛋白酶抑制或高温灭活可减少蛋白质对RNA的降解。
三、易获取与处理
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快速繁殖 :酵母生长周期短(约4小时一代),适合大规模培养。
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细胞壁易破坏 :可通过沸水浴或酸处理有效破碎细胞壁,释放RNA。
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残余物利用 :提取后剩余的菌体蛋白仍可回收利用。
四、应用价值
提取的酵母RNA可用于基因表达分析、基因克隆等实验,且不同生长条件下的RNA差异有助于研究代谢机制。
酵母因高RNA含量、易分离特性及实验便利性,成为RNA提取的理想材料。