2.67%-10.0%
啤酒酵母(干酵母)的RNA提取率受提取方法、条件等因素影响较大,通常在 2.67%-10.0% 之间。以下是具体说明:
一、常规提取方法的提取率范围
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浓盐法
通过调整氯化钠浓度(如8%)、温度(100℃)和时间(4小时),提取率可达6.13%。
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破壁辅助法
结合盐破壁(8%盐浓度、121℃、30分钟)或高压均质(70MPa、3次均质),提取率分别为2.21%和3.08%。
二、影响提取率的关键因素
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温度
100℃是促进RNA释放的常用温度,但过高可能破坏RNA结构。
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盐浓度
8%-10%的盐浓度能有效抑制蛋白质沉淀,同时促进RNA溶解。
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时间与离心
足够的提取时间(如1小时以上)和高速离心(10000g以上)有助于RNA沉淀纯化。
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后续处理
低温(如pH 2.0-2.5)沉淀可减少RNA降解,避免使用乙醇等破坏性试剂。
三、实际应用中的提取率表现
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高效提取方案 :采用磁珠法或磁性固定化技术,结合优化条件(如100℃、8%盐、4小时),提取率可提升至90%以上。
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样品量与纯度 :2×10⁸个酵母细胞样本可提取30-100μg RNA,A260/A280比值控制在1.8-2.0之间,表明RNA纯度较高。
四、注意事项
不同实验体系(如活性干酵母与啤酒酵母泥)的提取率可能存在差异,建议根据具体材料调整条件。商业试剂盒可在30分钟内完成提取,且纯度较高,适合高通量实验。