DNA粗提取实验步骤及原理如下:
一、实验原理
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DNA溶解度特性
DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,当浓度为0.14mol/L时溶解度最低,此时DNA会析出形成絮状物。
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蛋白质与DNA的溶解性差异
DNA不溶于酒精,但细胞中的蛋白质可溶于酒精,利用这一特性可进一步纯化DNA。
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二苯胺鉴定
DNA在沸水浴中遇二苯胺会呈现蓝色,这是鉴定DNA的常用方法。
二、实验步骤
(一)细胞核DNA的粗提取
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细胞核裂解
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向鸡血细胞液(含抗凝剂柠檬酸钠)中加入蒸馏水,充分搅拌5分钟,使细胞膜和核膜破裂,释放DNA。
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若使用离心法,可快速沉淀血细胞,取上层清液。
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DNA溶解与析出
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加入2mol/L NaCl溶液,搅拌使DNA充分溶解。
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缓缓加入蒸馏水,调节NaCl浓度至0.14mol/L,继续搅拌至出现黄色絮状物(DNA),过滤后收集含DNA的滤液。
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DNA再溶解与纯化
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将滤液中的DNA溶解于冷2mol/L NaCl溶液中。
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加入95%冷酒精,搅拌析出DNA丝状物,过滤后收集。
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(二)植物细胞DNA的粗提取(替代鸡血细胞)
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细胞破碎
- 加入洗涤剂和食盐,搅拌研磨植物细胞,过滤后收集研磨液。
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纯化
- 加热研磨液至60-80℃,使蛋白质变性,离心分离,上层水即为纯化后的DNA。
三、注意事项
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抗凝剂使用
- 鸡血需加入柠檬酸钠抗凝,防止凝固。
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温度控制
- 二苯胺浴需在沸水浴中加热5分钟,避免DNA降解。
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重复操作
- 过滤时使用多层纱布(第2次过滤DNA丝状物)。
通过以上步骤,可成功提取出含DNA的粗制品,并通过二苯胺染色进行初步鉴定。