酵母RNA的提取及组分鉴定是分子生物学实验中的重要内容，以下是详细步骤和原理：

一、酵母RNA的提取

1. 细胞破碎与碱提取

   • 取1g干酵母，加入石英砂和0.04mol/L NaOH溶液研磨5分钟，使细胞壁破裂。

   • 加入4ml NaOH至匀浆液，充分混合后转移至大试管，用4ml NaOH洗涤研钵，洗涤液合并。

2. 高温灭菌与离心

   • 将混合液沸水浴加热30分钟，冷却后离心（2000r/min，15min），取上清液。

3. 乙醇沉淀与纯化

   • 加入10ml酸性乙醇，边加边搅拌至RNA沉淀完全，离心（2000r/min，3min）。

   • 弃去上清液，加入95%乙醇洗涤2次，离心（2000r/min，3min），最后用乙醚抽滤干燥。

二、酵母RNA的组分鉴定

1. 核糖的鉴定

   • 取少量水解液（1.5-2ml），加入5% H₂SO₄和3,5-二羟甲苯，沸水浴加热10分钟。

   • 加入比色皿，观察颜色变化：黄色→绿色→蓝色，绿色深浅与核糖含量正相关。

2. 嘌呤的鉴定

   • 取水解液，加入浓氨水与硝酸银反应，观察是否生成白色絮状沉淀（嘌呤银）。

3. 磷酸的鉴定

   • 取水解液，加入钼酸铵（酸性）和抗坏血酸，沸水浴加热后显蓝色（钼兰反应）。

4. 紫外吸收光谱分析

   • 通过190nm和280nm处的吸收峰差异，判断RNA的纯度。RNA通常在280nm处有显著吸收，而DNA在280nm和190nm处吸收峰接近。

三、注意事项

• RNA降解 ：提取过程中需避免RNA降解，高温灭菌时间不宜过长。

• 试剂选择 ：使用TE缓冲液保持pH稳定，避免使用酸性过强的乙醇直接沉淀。

通过上述步骤，可高效提取酵母RNA并鉴定其核心组分，为后续的基因表达分析奠定基础。