DNA粗提取与鉴定实验中离心的目的可分为以下三点:
一、初步分离DNA与细胞器/大分子杂质
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盐析法
通过调节NaCl浓度,利用DNA在不同盐浓度下的溶解度差异实现初步分离。例如,在0.14mol/L低盐浓度下,DNA溶解度最低,可析出;而在2mol/L高盐浓度下,DNA重新溶解。
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酒精沉淀法
DNA不溶于酒精,但细胞中的某些蛋白质可溶于酒精。通过向滤液或离心管中加入酒精并搅拌,可沉淀出含DNA的白色丝状物,同时去除部分蛋白质。
二、纯化DNA
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去除残留蛋白质
初步分离后,DNA仍可能残留少量蛋白质。通过蛋白酶消化(如酚-氯仿混合液)或重复酒精沉淀步骤,可进一步去除蛋白质。
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减少DNA降解风险
低温离心(如4℃)可防止DNA因高温变性或反复冻融而降解,从而提高纯度。
三、收集与鉴定准备
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收集DNA沉淀
经过多次离心后,DNA会沉淀在管底。需轻柔收集沉淀物,避免断裂。
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鉴定前的处理
将DNA沉淀溶解于TE缓冲液(Tris-HCl和EDTA)中,转移至-20℃保存,为后续的二苯胺鉴定做准备。
总结 :离心在DNA粗提取中起关键作用,通过盐析、酒精沉淀和低温处理等步骤,实现DNA与杂质的分离与纯化,为后续鉴定奠定基础。