dna的粗提取与鉴定完整步骤

以下是DNA粗提取与鉴定的完整实验步骤及原理说明:


一、材料准备

  1. 实验材料选择
    优先选用DNA含量高的生物组织(如鸡血细胞或洋葱)。鸡血需提前与抗凝剂(如柠檬酸钠)混合防止凝固,离心后取细胞悬液‌。

二、细胞破碎与DNA释放

  1. 破碎细胞
    加入等体积蒸馏水,沿同一方向快速搅拌5分钟,使细胞吸水涨破释放核物质‌。
  2. 初步过滤
    用纱布过滤去除细胞膜碎片和大分子杂质,保留含DNA的滤液‌。

三、DNA溶解与杂质去除

  1. 溶解DNA
    向滤液中加入2mol/L NaCl溶液40mL,沿同一方向搅拌至完全溶解,此时DNA溶解度高,部分蛋白质沉淀‌。
  2. 去除杂质
    离心或静置后取上清液,去除沉淀的蛋白质‌。

四、DNA析出与纯化

  1. 改变浓度析出DNA
    缓慢沿烧杯壁加入蒸馏水,降低NaCl浓度至0.14mol/L,DNA因溶解度最低形成白色絮状沉淀,而蛋白质仍溶解‌。
  2. 收集DNA沉淀
    用纱布过滤或离心(1500r/min,5分钟)收集DNA黏稠物‌。
  3. 酒精纯化
    加入等体积预冷的95%酒精,沿同一方向轻缓搅拌,DNA析出成丝状物,蛋白质溶解于酒精。离心后弃上清,保留沉淀‌。

五、DNA再溶解与鉴定

  1. 再溶解DNA
    将沉淀溶于2mol/L NaCl溶液中备用‌。
  2. 二苯胺鉴定
    取两支试管,分别加入5mL 2mol/L NaCl溶液(一支加DNA溶液,另一支为空白对照),再各加入4mL二苯胺试剂。沸水浴加热5分钟,含DNA的试管显蓝色‌。

关键原理总结

  1. 溶解性差异
    DNA在2mol/L NaCl中溶解度高,0.14mol/L时析出,而蛋白质相反‌。
  2. 酒精沉淀
    DNA不溶于冷酒精,可进一步去除脂质和蛋白质‌。
  3. 显色反应
    DNA与二苯胺在沸水浴下生成蓝色化合物‌。

注意事项

  • 使用塑料器皿减少DNA吸附损失‌。
  • 搅拌方向需一致,避免DNA断裂‌。
  • 酒精需预冷以提高DNA纯度‌。
提示:本内容不能代替面诊,如有不适请尽快就医。
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