DNA粗提取与鉴定实验步骤
DNA粗提取与鉴定实验是一个经典的生物学实验,旨在让学生了解如何从生物组织中提取DNA,并通过简单的化学反应来鉴定DNA的存在。以下是详细的实验步骤:
- 提取细胞核物质:取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中,加蒸馏水20mL,同时,用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌,使血细胞过度吸水破裂,细胞核内物质释放出来,然后用纱布过滤取其滤液。
- 溶解核内的DNA:在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,核中DNA游离并充分溶解,染色质中的DNA和蛋白质分离。
- 析出DNA黏稠物:沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水,同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌。
- 滤取DNA黏稠物:用多层纱布过滤,取纱布上DNA的黏稠物。
- DNA黏稠物再溶解:取含DNA的黏稠物放入桡杯内,加入2mol/L的NaCl溶液40mL,用玻璃棒沿一个方向不停搅拌3min,使黏稠物尽可能多地溶解。
- 过滤含DNA的氯化钠溶液:用两层纱布过滤含DNA的氯化钠溶液,取其滤液。
- 提取含杂质较少的DNA:在滤液中加入冷却的无水乙醇,并用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌,由于DNA不溶于酒精,会出现乳白色丝状物,用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸去表面的水分。
- DNA的鉴定:两支试管中各加入0.015mol/L的NaCl溶液5mL,将丝状物放入其中一支试管中,搅拌使其充分溶解后,向两支试管中分别加入4mL二苯胺试剂,混匀后沸水溶中加热5min,待试管冷却后,比较两试管的颜色变化,将发现加入DNA的试管中的溶液呈蓝色,从而鉴定DNA的存在。
以上就是DNA粗提取与鉴定的基本步骤。需要注意的是,在整个实验过程中,要尽量避免DNA分子断裂,并且要注意实验安全。