草甘膦一般 5 - 7 天见效，杂草叶片开始变黄，15 天左右杂草才会彻底死亡。不过，死草时间会受到多种因素的影响，具体如下：
- 杂草种类：不同杂草对草甘膦的敏感度不同。像狗尾草、看麦娘等一年生杂草，对草甘膦较为敏感，通常在施药后 7 - 10 天就会有明显的死亡症状。而对于白茅、香附子等多年生恶性杂草，草甘膦可能需要更长时间才能将其彻底杀死，一般需要在第一次用药后间隔 1 个月左右再施 1 次药，才能达到理想的防治效果。
- 温度：温度对草甘膦的药效发挥有较大影响。日平均气温达到 10℃以上时，草甘膦的防效可超过 80%；日平均气温在 15 - 25℃时，除草效果较好；当温度为 24 - 25℃时，杂草对草甘膦的吸收量会随着温度的上升而增加。如果温度低于 10℃，草甘膦的药效会大打折扣，只有一半左右；当气温低于 5℃时，使用草甘膦基本无效。
- 湿度：空气湿度较大时，植物叶片的气孔开放，有利于草甘膦的吸收，能更好地发挥药效。
- 光照：充足的光照有助于杂草进行光合作用，促使其更多地吸收和传导草甘膦，从而加快死草速度。在晴天光照好的条件下施药，草甘膦的效果通常比阴天或光照不足时要好。
- 药剂浓度和用量：如果草甘膦的浓度过低或用量不足，可能无法有效杀死杂草，导致死草时间延长，甚至除草效果不佳。但也不能随意加大药剂浓度和用量，否则可能会对环境造成污染，还可能产生药害。
- 施药时间：在杂草生长旺盛期，叶片面积大且生长迅速，对草甘膦的吸收能力强，此时施药能使杂草更快地吸收药剂，死草速度也会加快。若杂草生长后期，植株老化，吸收和传导草甘膦的能力下降，死草时间就会延长。
不同的草甘膦复配药剂死草时间也有所不同。例如，2 甲・草甘膦喷施后，当天杂草即表现出中毒症状，一般 3 - 5 天杂草即可枯死；苯嘧・草甘膦施药后当天杂草中毒，3 天杂草全部枯死。
