Bcl-2基因检测通常涉及到两种主要的方法:流式细胞术和RT-PCR法。
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流式细胞术:这种方法使用抗Bcl-2蛋白抗体来检测细胞浆中的Bcl-2蛋白量。具体步骤包括收集凋亡肿瘤细胞,用含2%小牛血清的PBS洗2次,然后加入2%多聚甲醛室温固定20min,再用PBS配制的Staing缓冲液洗涤。之后,通过流式细胞仪检测荧光强度(MFI)的变化,计算Bcl-2阳性细胞表达率和Bcl-2蛋白表达的平均荧光强度。
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RT-PCR法:这种方法用于检测细胞中Bcl-2 mRNA的表达。首先需要提取总RNA,并使用RNA酶抑制剂以避免RNA酶污染。通过逆转录将mRNA转化为cDNA,最后通过PCR扩增Bcl-2基因片段。这种方法可以定量分析Bcl-2 mRNA的表达水平。
以上两种方法各有优缺点,选择哪种方法取决于研究目的和实验室条件。