DNA粗提取与鉴定实验原理与步骤
一、实验原理
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溶解性差异
- DNA在 2 mol/L NaCl溶液 中溶解度较高，但 不溶于酒精。
- 在 0.14 mol/L NaCl溶液 中，DNA溶解度最低，可析出沉淀；而部分蛋白质仍保持溶解状态。
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分离与纯化
- 利用 酒精（体积分数95%） 去除可溶性蛋白质（如蛋白酶、脂质等），因DNA不溶于酒精。
- 通过调节NaCl浓度，选择性溶解或析出DNA。
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鉴定方法
- DNA与 二苯胺试剂 在沸水浴（约100℃）下反应，生成蓝色化合物。
二、实验步骤
（一）材料准备
- 优先选择 DNA含量高 的材料（如鸡血细胞、洋葱）。
- 若使用鸡血，需提前与 抗凝剂（柠檬酸钠） 混合，离心后取细胞悬液。
（二）细胞破碎与DNA释放
- 加入等体积蒸馏水，沿同一方向快速搅拌，使细胞吸水涨破，释放核物质。
- 用 纱布过滤 去除细胞碎片，保留含DNA的滤液。
（三）DNA溶解与杂质去除
- 向滤液中加入 2 mol/L NaCl溶液，搅拌至完全溶解。
- 离心或静置后取上清液，去除沉淀的蛋白质。
（四）DNA析出与纯化
- 改变盐浓度析出：缓慢加入蒸馏水，使NaCl浓度降至 0.14 mol/L，DNA形成白色絮状沉淀。
- 酒精纯化：加入预冷的 95%酒精，轻缓搅拌使DNA析出成丝状物，离心后保留沉淀。
（五）DNA再溶解与鉴定
- 将沉淀溶于 2 mol/L NaCl溶液 备用。
- 二苯胺鉴定：
- 取两支试管，分别加入DNA溶液和空白对照（仅NaCl溶液）。
- 加入 二苯胺试剂，沸水浴加热5分钟，含DNA的试管显蓝色。
注意事项
- 使用 纱布过滤 而非滤纸，避免DNA吸附损失。
- 操作酒精和搅拌时需轻缓，防止DNA断裂。
- 二苯胺试剂需现用现配，沸水浴时间需充足。
以上流程综合了 鸡血细胞 和 洋葱 两种常见材料的处理方法，可根据实际实验条件调整具体步骤。
