测定鱼肉中组胺含量的方法有多种,以下是几种常见且有效的方法:
1. 液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)
原理:利用液相色谱分离组胺,再通过质谱进行定量分析
- 1.样品前处理:取2g鱼肉样品,加入标准品和去离子水,震荡5分钟。
- 2.萃取:加入乙腈水溶液,震荡10分钟,离心5分钟。
- 3.净化:取上清液通过FaTEx-his组胺专用柱,收集滤液。
- 4.分析:将滤液上机到LC-MS/MS进行分析
2. 高光谱成像技术(HSI)
原理:通过高光谱扫描系统分析鱼肉中的组胺分布,快速、无损地检测组胺含量
1.样品扫描:使用高光谱扫描系统对生金枪鱼样品进行扫描。
2.数据分析:基于扫描数据,使用软件(如Insight)开发分类模型,计算组胺浓度。
3.结果呈现:结果可以可视化呈现,也可以通过协议传输
3. 比色法
原理:鱼肉中的组胺用正戊醇提取,与偶氮试剂反应显橙色,与标准系列比较定量
1.标准曲线制定:配制不同浓度的组胺标准溶液,与偶氮试剂反应,测定吸光度,绘制标准曲线。
2.样品提取:取10.0g鱼肉,加入三氯乙酸浸泡,过滤后用NaOH调节pH至9-10,用正戊醇提取三次,合并上层液。
3.显色反应:取提取液,加入Na2CO3和偶氮试剂,反应10分钟后测定吸光度。
4.计算:根据吸光度值和标准曲线计算组胺含量
4. 显色法试剂盒
原理:利用组胺脱氢酶特异性分解组胺,通过四唑盐显色测定吸光度,计算组胺浓度
1.样品制备:将鱼肉剁碎,加入提取用溶液,搅拌均匀。
2.加热处理:沸水浴20分钟,加热处理后冷却。
3.过滤:用滤纸过滤提取液。
4.显色反应:加入显色试剂和酶溶液,37℃孵育15分钟,测定吸光度。
5.计算:根据吸光度值计算组胺含量
5. 快速检测法
原理:利用快速检测卡,通过显色反应快速判断组胺含量
1.样品处理:将鱼肉打浆,加入提取液,震荡混匀,静置。
2.检测:取上清液滴入速测卡加样孔中,4-5分钟内读取结果。
3.结果判定:根据显色条带判断组胺含量
注意事项
- 样品新鲜度:组胺含量与鱼的新鲜度密切相关,不新鲜的鱼会产生更多组胺。
- 前处理:不同方法的样品前处理步骤有所不同,需根据具体方法操作。
- 仪器设备:部分方法需要特定的仪器设备,如LC-MS/MS、高光谱扫描系统等。
结论
选择合适的测定方法取决于具体需求和条件。LC-MS/MS和高光谱成像技术适用于高精度和快速检测,而比色法和显色法试剂盒则适用于常规实验室和现场快速检测。