鱼类食品中的组胺测定通常采用以下几种方法:
1. 偶氮比色法
原理:组胺与重氮盐发生偶氮反应生成有色化合物,通过比色测定其含量。
操作步骤:
- 样品处理:称取鱼类组织样品,加入三氯醋酸溶液混匀,水浴温浸后过滤,收集滤液。
- 标准系列管制备:配制不同浓度的组胺标准溶液。
- 样品管制备:吸取样品处理液。
- 加偶氮试液:向标准管和样品管中加入对氨基苯磺酸钠和盐酸-亚硝酸钠试液,加蒸馏水至一定体积,静置。
- 比色测定:使用分光光度计在特定波长下测定吸光度,绘制标准曲线,计算样品中组胺含量。
2. 高效液相色谱法(HPLC)
原理:利用高效液相色谱仪分离并测定组胺含量。
操作步骤:
- 样品处理:将鱼类样品用乙腈和水的混合溶液提取,加入C18分散剂,超声、离心后取上清液。
- HPLC分析:使用C18分析柱,以甲酸水-乙腈为洗脱液,梯度洗脱,通过高分辨质谱仪检测组胺含量。
3. 荧光法
原理:利用组胺与特定试剂反应生成荧光物质,通过荧光光度计测定其含量。
操作步骤:
- 样品处理:将鱼类样品通过离子交换树脂,与特定试剂混合生成荧光产物。
- 荧光测定:使用荧光光度计在特定波长下测定荧光强度,绘制标准曲线,计算样品中组胺含量。
4. 快速检测卡法
原理:利用免疫层析技术,通过检测卡上的抗体与组胺反应,根据显色结果判断组胺含量。
操作步骤:
- 样品处理:将鱼类样品打浆,加入提取液震荡混匀。
- 检测卡检测:将样品上清液滴入检测卡加样孔,根据显色结果判断组胺含量。
以上方法各有优缺点,选择合适的方法需要根据具体需求和条件来决定。偶氮比色法和荧光法操作相对简单,适用于常规检测;HPLC法准确度高,适用于精确定量分析;快速检测卡法便捷快速,适用于现场检测。