透析实验步骤如下:
- 准备工作 :
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选择合适的透析袋,根据分子量截留选择合适的透析袋,确保其截留分子量适合样品,防止目标分子被透析出去。
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将透析袋剪成适当长度,做成口袋形状,用蒸馏水或去离子水冲洗去除可能的杂质,并储存于4℃的去离子水中。
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预处理透析袋:将透析袋放入含有5 mmol/L EDTA和200 mmol/L碳酸氢钠的大体积烧杯中,煮沸5分钟,弃掉溶液后,用去离子水彻底洗涤透析袋。
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灭菌处理:加入大量的去离子水,用铝箔覆盖烧杯,进行湿热高压灭菌10分钟,储存于4℃的灭菌广口容器中。
- 样品装载 :
- 将样品小心地装入透析袋中,确保没有气泡,用夹子或橡皮筋封口,确保密封良好。
- 透析操作 :
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将装有样品的透析袋放入大体积的透析缓冲液中,透析缓冲液的体积应至少是透析袋内样品体积的100倍。
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定期更换透析缓冲液,通常每2-4小时更换一次,以加速透析过程。
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透析时间通常为2-24小时,具体时间取决于样品的性质和所需的纯化程度。
- 透析后的处理 :
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透析完成后,小心地从透析缓冲液中取出透析袋,避免样品泄漏,用去离子水冲洗去除表面的缓冲液。
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收集样品并进行必要的分析检测,如蛋白质浓度、活性等。
这些步骤涵盖了从透析袋的准备到样品的装载、透析过程以及透析后的处理,确保了透析实验的顺利进行和样品的有效纯化。